線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶試劑盒紫外分光光度法說明書
紫外分光光度法 25管/24樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性：
產品名稱：線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶試劑盒紫外分光光度法
貨號：LZ-S016-A
規格 : 25管/24樣
測試方法:紫外分光光度法
產品分類：輔酶Ⅰ系列
發貨地：上海
測定意義:
復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體內膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH 傳遞給 CoQ，同時可使 O2還原生成 O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產生 O2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態。
測定原理:
復合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+，在 340nm 下測定 NADH 的氧化速率計算出該酶活性的大小。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一：25mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：5mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5 mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑四：25mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑五：1 mL×1 支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 2mL 蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
工作液的配制：臨用前將試劑五轉移到試劑四中混合溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
① 準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細菌或細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿 600g，4℃離心 5min。
③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ（此步可選做）。
⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體，加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10 秒，重復 30 次），用于復合體Ⅰ酶活性測定。
生化檢測試劑盒操作步驟：
一、?準備工具和環境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學實驗的步。
?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?：按照說明書的指導，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。杭州
?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產生泡沫，以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?：混合后，耐心等待試劑盒的反應，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?：時間到后，仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
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