人神經特烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒
要求
做好對照
正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特反應,可采用羊、兔或BSA等封閉。
實驗條件的選擇
在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多可作為固相載體,如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記工作濃度的選擇:用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度)在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
進口分裝:
檢測范圍和靈敏度不同,用量少時,可使用分裝,前期是它的長久性不是很好。
試劑盒的曲線
試劑盒的曲線相關系數R≥0.98。
試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測,避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。
檢測及酶結合物的稀釋度(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作,實驗結果的重復性。
白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種形成,它的特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協同作用的等,也備受關注. 并且已證實白介素-6與病理學存在的相關關系.例如,報道多種的生長因子為白介素-6, 瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性和自身發揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠和細胞基質上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94的 700 pg/mL 預期用途
ELISA法是診斷中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、病及非傳染病等方面的診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據已經使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于流行病學調查。本法不僅可以用來測定,而且也可用于測定中的循環抗原,所以也是一種早期診斷的良好。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大,
ELISA的基礎是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或仍保持其學活性,酶標記的抗原或既保留其學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的或抗原)與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復合物與中的其他分開。再加入酶標記的抗原或,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了反應的結果,使測定達到很高的度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定。
操作:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二(抗)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
6.一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。
主營產品: ELISA試劑盒,ELISA檢測試劑盒,標準品,生化試劑
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