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防病技水
預防就是利用人工方法增強生物體的自身能力以到預防疾病發生的目的。人工是將人工制成的生物制品(如、菌苗、類毒素或細胞制劑等)接種到魚體,使魚體自身產生對相應疾病的防御能力。水產上使用的生物制品主要為。
按其性質與成分分為單價苗、多價苗和聯苗;按針對病原種類分為病毒、菌苗、寄生蟲苗。根據制備方法可分為活、滅活、代謝產物和亞單位及生物技術苗。其中生物技術包括基因工程亞單位、合成肽、抗特型抗體、基因工程活載體及DNA。
一、病毒病防病技術 1.草魚病
草魚病是由草魚病病毒(grass carp hemorrhage vi- rus,GCV)引起的、嚴重危害草魚養殖的傳染性疫病。
(1)常用種類 我國在草魚病方面的魚苗主要有以下三類。
①組織 在草魚病病原體尚未有明確定論時,養殖生產上已開始使用組織防控草魚病,制備方法如下∶取典型患病癥狀的魚體肝、脾、腎和肌肉組織,無菌生理鹽水沖洗后,加入生理鹽水或磷酸緩沖液(PBS)制成1∶10勻漿液,離心取上清液,分別加入800單位/毫升青霉素和800微克/毫升鏈霉素及0.1%福爾馬林,56℃滅活2小時或32℃滅活72小時,4~8℃可保存半年以上。使用方法∶肌內或腹腔注射,保護率可達 70%以上。
組織的制備技術和工藝比較簡單,對設備要求不高,極易被各級水產技術單位掌握,因此推廣和應用迅速。而且組織價格低廉、效果較好,受到廣大養殖者的喜愛,尤其與腸炎病、爛鰓病和草魚赤皮病一起制備的組織實際上成為了一種多聯,在生產中表現出穩定的防控效果。
②細胞通過把病毒接種到細胞中,病毒繁殖出現病變后收獲病毒再滅活制成的。我國已建立了ZC-7901、CIK、 PSF 等草魚敏感細胞株,并掌握了其工廠化培養技術,為草魚病細胞提供了強大的基礎。草魚病病毒大規模培養方法主要有兩種∶一種是采用微載體大規模培養細胞,即將細胞吸附在 GT-2微載體上,再將微載體懸浮培養,單位體積培養液的細胞培
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效率比靜置培養高 20~25倍,病毒滴度可提高45倍左右,但用于微載體細胞培養的生物反應器需要有全面的培養參數、氣體控制設施,價格較為昂貴;另一種是采用旋轉管進行細胞培養,WC21- 891旋轉培養機可容納3000毫升的血清瓶21個,單位培養液的細胞產量比靜置培養高3.5~5倍,該裝置及相應培養室要求較之生物反應器低廉,比較適合一般的實驗室進行制備。
③弱毒活制備方法∶將病毒株接種于PSF細胞,于培養液中加人1∶1000濃度病毒液,29代后獲得性狀穩定的減毒株GCHV-892株,去除培養液,其減毒效果保持穩定不變。減毒株對草魚沒有致病力,但有較好的原性。目前,弱毒活已在廣東、廣西、福建、海南、湖北、湖南、四川、浙江、江蘇等多個地區進行了區域性試驗,保護率高達90%以上。